A260:是核酸比较高吸收峰的吸收波长,比较好测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围,稀释或浓缩样品,使之在此范围内;如果吸光度小于0.05,检查是否存 在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常 会对光有一定吸收,其值<0.1);
A280:是蛋白比较高吸收峰的吸收波长.
A230:是碳水化合物比较高吸收峰的吸收波长:
A260/A280:是核酸纯度的指示值。纯度好的DNA或RNA,在pH7-8.5 下A260 / A280的比值应该在2.0 或2.5。 纯净的样品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A260/A230:纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2,辽宁高重复性超微量分光光度计蛋白检测.0标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,辽宁高重复性超微量分光光度计蛋白检测,辽宁高重复性超微量分光光度计蛋白检测,需要纯化样品。
Micro Drop的基座模式可检测0.5-2μl的样本。辽宁高重复性超微量分光光度计蛋白检测
Micro Drop蛋白质检测功能:
Protein Bradford检测方式:
Bradford是常用的蛋白定量检测的方法。它通常用于浓度比较低的蛋白的浓度检测。与其他比色法一样,Bradford法检测蛋白浓度时必须构建一个标准曲线。
Bradford法是根据蛋白质在酸性溶液中,能够使考马斯亮蓝结合,使得染料的比较大吸收峰值变更为595nm来检测蛋白浓度。检测蛋白-染料复合物在595nm处的吸光值,并在750nm处做基线校正,计算得出蛋白的浓度。
常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为50:1,检测浓度范围为0.10mg/ml到8.0mg/ml(BSA),比较好线性浓度范围在0.01-1mg/ml。当使用基座检测时,推荐使用4μl样品和200μl Bradford试剂。
微量检测使用试剂/样品的体积比为1:1,可以检测蛋白浓度范围从15ug/ml至125ug/ml。要准备足够的样品来做基座检测,建议使用10μl样品和10μlBCA试剂(使用PCR管)。
按照试剂盒生产厂家的说明来准备标准品和和构建标准曲线。确保在所有检测过程中,每个样品的处理时间及环境温度一致。
山西双检测模式超微量分光光度计探针检测分光光度计是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。
Micro Drop基座检测空白循环:
我们建议把空白对照当成样品来检测,这样可以确认仪器性能完好并且基座上没有样品残留,按下列操作来运行空白循环:
1. 软件中打开将进行的操作模式,把空白对照加到基座上,并把样品臂放下。
2. 点击空白检测来进行空白对照检测并保存参比图谱。
3. 重新加空白对照到基座上,把它当成样品一样来检测,点击检测,结果应该是差不多为一水平线,吸光
值变化应不超过0.04A(10mm光程)。
4. 擦去上下基座上的液体,重新进行上面的操作,直到检测光谱图的变化不超过0.04A(10mm光程)。
虽然不需要在每个样品之间进行空白检测,但我们建议在检测多个样品时,比较好每30min进行一次空白检测。
宝予德超微量分光光度计使用时注意小贴士:
(1)测量前将样品中度混匀(可采用震荡器或用手指弹震管底)
(2)移液器吸头插入液面下吸取样品,可避免吸入气泡;TIP头贴着下光纤表面打出样品,且只按到移液器***挡尽头,***挡不要按,可以避免吹出气泡到样品中。
(3)每次测量完毕后,用蒸馏水清洁上下光纤端面,这样可以更好地***下一次测量的准确性(主要针对超高浓度样品,一般样品无此要求)。
(4)每次做空白检测***定要先用水清洁上下光纤表面,可***空白检测准确。
(5)每次测量的核酸样品量建议为1-2微升,蛋白样品建议2微升。 过少可能无法形成水柱,过多可能溢出。
(6)加样后尽快测量,以防蒸发浓缩以及灰尘落入,已加样品不能多次检测,如需重测需重新滴加同一样品。
(7)仪器避免阳光直射,避免强风吹拂,以避免蒸发。
(8)连续测量一段时间后擦净样品,用水清洁上下光纤表面,然后用水或缓冲液进行重新空白后再检测。
(9)清洁光纤端面(上样基座)时必须用洁净质软的实验室用纸(擦镜纸等)进行轻轻擦拭。
使用分光棱镜或者光栅产生光谱,并利用其中特定的某个或某段光谱线强度来进行分析的仪器叫做分光光度计。
分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性或定量分析。常用的波长范围为:(1)200~380nm的紫外光区,(2)380~780nm的可见光区,(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为***测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。Micro Drop超微量每次测量完毕后,用蒸馏水清洁上下光纤端面。陕西超微量分光光度计样品检测
每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。辽宁高重复性超微量分光光度计蛋白检测
超微量分光光度计的应用:
(一)核酸的定量:
核酸的定量是超微量分光光度计使用频率比较高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链DNA、双链DNA,以及RNA。核酸的比较高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。除了核酸浓度,分光光度计显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
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